单体分离

目前我们这里想建立一个标准品制备的平台，主要从中药天然药物中分离相关单体为主，因此想购买些单体分离的设备，主要考虑的是制备液相和高速逆流色谱为主。国内有一家公司在代理叫嘉盛（香港)科技有限公司，你可以去他们网站上了解一下goodwill-techcom或者我也可以发一份资料给你看一下。如果你是想用洗结晶的方法你只好多试几种溶剂了>>查看全部评论欢迎监督和反馈：本帖内容由提供，小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。而且其中有几个化合物的在聚酰胺薄层上挨得挺近的，开始小弟用聚酰胺柱子来分不知是什么原因是分不开，我用的是水和甲醇梯度洗可我开始用水溶液上样把所以的东西给洗了下来一个都没分开。

薄层上挨得很近的话，说明极性的大小很相近，如果分子量相差不大的话，葡聚糖凝胶的分子筛原理分离效果也不一定会好。我是先上大孔树脂梯度分离，把极性切成几段，然后再对每一段进行分离，这样简单多了；接下来再用硅胶也比较容易分离了，硅胶的效果单体分离还不错，只是得重复上柱，或者要换-种展开剂，所以单体分离还是有点麻烦。>>查看全部评论欢迎监督和反馈：本帖内容由yangsitao提供，小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。

目前,在国内外只有本课题组对YLS进行了初步提取分离及相关药理药效研究,结果表明黄酮皂苷和多糖为YLS的主要活性部位;YLS提取物具有降血压抗自由基减轻心肌缺血再灌注损伤增加冠脉流量护肝抗炎抗肿瘤等作用。上述研究均立足于YLS的大类活性成分,随着课题的深入,非常有必要明确YLS有效的活性单体成分及其作用机制。本课题正是在前期工作的基础上,按照中药现代化的思维模式,以药理活性为指导进行追踪筛选,运用先进的植化分离纯化鉴定技术,对中药玉郎伞黄酮进行深度研究,得到玉郎伞黄酮的活性单体;通过建立相应的体内外模型,应用直接加药和血清药理学两种给药方式,从体内细胞蛋白水平探讨玉郎伞活性黄酮单体对氧自由基凝血缺氧心肌缺氧/复氧损伤HO诱导心肌细胞凋亡的作用及可能机制,为进一步的新药研发提供理论和实验依据。

单体分开

将只小鼠随机分为正常对照阳性对照溶媒对照YLSA～B的低中高剂量共组,每组只,均通过腹腔注射给药(ml/g),以毛细管法进行体内抗凝血作用研究。利用原代培养～d的大鼠乳鼠心肌细胞,随机分为正常对照H/R模型阳性药维拉帕米空白血清溶媒(%DMSO)YLSA～B单体及含药血清低中高剂量共7组,除正常对照组外,均建立H/R模型;除正常对照模型组外,于造模前加入相应药物或血清预孵h。倒置相差显微镜下观察H/R前后心肌细胞的形态学改变;以MTT法测定细胞存活力;按试剂盒说明测定H/R后各组心肌细胞培养上清液中MDAT-SODGSHLDHNOSTNF-а含量(活性)及心肌细胞Na+-K+-ATP酶Ca+-Mg+-ATP酶活性。

玉郎伞黄酮单体及含药血清对HO诱发心肌细胞凋亡的作用在原代培养的心肌细胞培养液中加入终浓度为μmolL-的HO,常规培养6h,建立心肌细胞凋亡模型,分组及给药方法同上(阳性药改用VitC),以AnnexV-FITC和PI双染法检测心肌细胞凋亡。造模结束后,各组爬片细胞以%多聚甲醛℃过夜固定后,采用免疫组化方法检测NF-κBpBcl-Bax蛋白的表达。

具体工艺为将YLS饮片粉碎,以%乙醇为提取溶剂,料液比,提取温度°C,微波功率W,提取时间min,提取次。

结合HSQCHMBCNOSEY谱,确定其结构式为Cis(顺)-,-二甲氧基查尔酮,首次从YLS植物中分离,经查阅SciFinder数据库表明此化合物亦为首次分离及报道核磁数据。

与空白对照组相比,YLSA～B单体的低中高浓度(终浓度分别为mgml-)均能清除·O-·OH,抑制·O-的生成(P0)并呈浓度依赖性。

与正常对照组相比,YLSA～B低剂量组均无明显抗凝血作用(P);YLSA～B中高剂量组则可使凝血时间明显延长(P)。

与正常对照组相比,YLSA～B低剂量组的存活时间无差异(P),YLSA～B中高剂量组则可显著延长缺氧小鼠的存活时间(P),其中,高剂量组效果,耐缺氧作用与VitC相似(P)。心肌细胞形态学变化光镜下可见原代培养～d后,心肌细胞融合成片,呈放射状排列,细胞之间伸出多个伪足交织成网状,细胞搏动同步化;H/R模型组心肌细胞胞浆空泡形成,细胞伪足收缩或消失,细胞折光率下降,异形心肌细胞数目增加并有大量细胞脱离悬浮溶解坏死,体内搏动幅度及频率减弱,节律不齐;YLSA～B单体及含药血清组可见少量的心肌细胞伪足回缩,细胞脱落悬浮现象,但损伤程度较模型组显著减轻且死亡细胞明显减少。与模型组相比,YLSA～B单体及含药血清中高剂量可显著增加心肌细胞活力及Na+-K+-ATP酶Ca+-Mg+-ATP酶活性降低心肌细胞培养上清夜中MDALDHiNOSTNF-а含量(活性)增加T-SODGSHcNOStNOS活性(P)。与模型组相比,中高剂量的YLSA～B单体及含药血清能明显降低HO诱发所致心肌细胞的凋亡(P)并呈剂量依赖性,以高剂量组效果最明显。与模型组相比,中高剂量的YLSA～B单体及含药血清均能下调NF-κBpBax蛋白表达,上调Bcl-蛋白表达增加Bcl-/Bax比值(P)。首次从YLS植物中分离出两个黄酮类活性单体,其中一个为新化合物,另一个系首次从植物中分离并报道核磁数据。两个YLS黄酮活性单体均具有抗氧化抗凝血耐缺氧保护心肌细胞缺氧/复氧损伤减轻心肌细胞凋亡的作用,并呈一定的剂量依赖性;其机制可能与抗氧化应激损伤提高GSHcNOSNa+-K+-ATP酶Ca+-Mg+-ATP酶活性降低LDHiNOSTNF-а活性下调NF-κBp和Bax蛋白表达上调Bcl-蛋白表达增加Bcl-/Bax比值而抑制心肌细胞凋亡有关。银杏酸(GinkgolicAcids,简称GA)是银杏中除黄酮和内酯外又一具有重要生理活性的组分,主要存在于银杏的叶(占干重的-%)果和外种皮(占干重的-%)中,尤以银杏果外种皮中含量。银杏酸为水杨酸的-烷基或-烯基衍生物,其苯环六位上的侧链碳原子数为～,侧链双键数为-。

单体分离主要由白果新酸(ginkgonelicacid)白果酸(ginkgolicacid)氢化白果酸(hydroginkgolicacid)氢化白果亚酸(hydroginkgolinicacid)白果二酚(bilobols)等组成。现代毒理学研究表明,银杏酸具有致敏性胚胎毒性免疫毒性和细胞毒性等生物毒性,被认为是银杏叶提取物(EGB)中最主要的毒副作用成分。欧美日和中国的国家药典均把银杏酸作为银杏叶提取物和制剂的限量要求列入质量标准,例如欧洲药典美国药典要求银杏酚酸含量(质量分数)控制在ppm以下,有的企业内部标准甚至要求低于ppm;《中国药典》200年版中也将银杏酸限度定为0ppm。本课题对银杏酸成分开展了如下研究：A银杏酸单体分离目的：从银杏外种皮中制备分离银杏酸单体方法：以银杏外种皮为原料,粉碎后加倍量石油醚(-℃)回流提取次,每次小时,合并提取液,浓缩,得银杏酸粗提物。银杏酸粗提物经小孔吸附树脂纯化,去除部分色素杂质；再经反相中压制备柱分离富集,得到流分Ⅰ(主要含银杏酸C：和C,少量C：)和流分Ⅱ(主要含银杏酸C1和少量C：)。

结晶用甲醇溶解,采用制备液相,以甲醇-水系统为流动相,进行分离纯化,制得银杏酸单体C：(白果新酸)；母液同样采用制备液相甲醇-水系统分离纯化,制得银杏酸单体CC。结果：从kg粉碎后的银杏外种皮中制得银杏酸单体C304.98g,C5.5g,C70.45g,C500.87g,C729.29g。

经HPLC-DAD检测和HPLC-MSH-NMR和C-NMR分析,证实制备所得银杏酸单体为C0CCC及C,其纯度均大于%。

结论：银杏酸外种皮通过石油醚回流提取小孔吸附树脂去色素中压制备柱粗分和制备液相纯化,可大量制备纯度大于%的银杏酸单体成分,解决了银杏酸定量测定时对照品缺失或对照品纯度低的难题,为后续新的分析方法的建立奠定了基础。B银杏酸定量分析方法的建立及在银杏叶提取物生产过程质量控制中的应用目的：建立新的更科学准确的银杏叶提取物中银杏酸限度的检查方法,并将其应用到银杏叶提取物大生产制备过程,指导除酸工艺,制备低酸银杏叶提取物。方法：银杏叶提取物以甲醇超声提取,制备供试品溶液；色谱分析条件：色谱柱为AgilentC,流动相为乙腈-‰三氟乙酸水梯度洗脱；流速mLmin-;检测波长20nm；以自制银杏酸单体为对照,建立新的银杏酸限度检查方法。