高压破菌系统

真核重组让研究更有价值●真核细胞本身的蛋白，尽量用真核表达，真核的表达环境使蛋白更有可能形成正确的结构，具备糖基化等修饰，更可能具有天然功能。恭喜你！如果你的实验是用真核表达的重组蛋白完成的，药企肯定会更感兴趣，因为这样的药物候选分子商业化风险更小。图（MD）在相同pH值所加的碳酸氢钠氢氧化钠的量及所对应的培养液渗透压灭菌方法培养基的灭菌方法主要有两种，高压除菌及um微孔滤膜过滤除菌。与过滤相比，高压灭菌的工作强度小，成本较低，但易造成营养成分的流失，而且在多次加样（无菌谷氨酰胺溶液，无菌碳酸氢钠溶液等）过程中容易造成二次污染。

大多数培养基采用～m孔径的微孔滤膜进行过滤灭菌，并且已成为培养基除菌的发展方向，高压破菌系统可低限度地减少培养基的营养损失。

高压灭菌某些培养基（如MEM）可进行高压灭菌，例如清大天一的MEM培养基中的MDMD等。

这类培养基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氢钠，一般是在培养基高压灭菌后加入L-谷氨酰胺和碳酸氢钠的无菌的液体。

可高压灭菌的培养基在℃psi，分钟的条件下完全可达到灭菌效果及营养成分的最小损失，不需将灭菌时间延长。

过滤灭菌可供过滤灭菌使用的滤膜很多，其材料多为polyethersulphone（PES）尼龙多聚碳酸盐醋酸纤维素硝酸纤维素PTFE陶瓷等。

高压破菌

一般情况下采取正压过滤，正压过滤较之负压过滤具有流速高过滤快不易污染，可避免蛋白质产生大量气泡等优点。目前大多数实验室和制药企业采用微孔滤膜滤器（如Zeiss滤器）或立式微孔滤器（MilliporePall）除菌。消毒时旋钮不要扭太紧，凡与空气接触部位都要包好（可用牛皮纸纱布无纺布等）；高压灭菌后，在无菌环境中立将旋钮扭紧。立式微孔滤器可以选用不同的微孔滤柱体积，因为滤膜的折叠，膜面积显著增大，液体处理量大，而且不容易发生堵塞现象。细胞培养液的储存细胞培养液的储存条件一般为～℃密闭避光保存，但要注意如下几点：过滤后的完全培养液，添加了血清谷氨酰胺抗生素等的培养液要尽快使用，一般在～周内使用完。灭菌后的未加L-谷氨酰胺等添加剂的培养基溶液，一般可在℃保存～个月，也可冷冻保存,用时解冻。添加了谷氨酰胺的培养液放置周后，要补加和原来同样量的谷氨酰胺，但这样并不能消除谷氨酰胺降解产生的游离氨，建议配制好的培养液尽快使用。图pH为时不同温度mM谷氨酰胺的稳定性图室温下不同pH时mM谷氨酰胺的稳定性添加某些生长因子激素等添加物，可能会改变培养液的储存条件，比如温度时间等方面的要求。

细胞培养基从年开始发展到现在，有MEMDMEMRPMI等基础细胞培养基，高压破菌系统还有低血清细胞培养基无血清细胞培养基甚至无蛋白培养基，种类繁多各具特点。

在使用过程中，只有根据各类细胞培养基的特性特点正确的选择配制方法灭菌方法储存方法，才能程度地保持细胞培养基的营养，发挥细胞培养基的功效。